關鍵詞:基因克隆實驗|實驗技術服務
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基因克隆實驗|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序實驗流程：
基因克隆技術包括把來自不同生物的基因同有自主復制能力的載體DNA在體外人工連接，構建成新的重組DNA，然后送入受體生物中去表達，從而產生遺傳物質和狀態(tài)的轉移和重新組合。因此基因克隆技術又稱為分子克隆、基因的無性繁殖、基因操作、重組DNA技術以及基因工程等。
用重組DNA技術，將不同來源的DNA分子在體外進行特異切割，重新連接，組裝成一個新的雜合DNA分子。在此基礎上，這個雜合分子能夠在一定的宿主細胞中進行擴增，形成大量的子代分子，此過程叫基因克隆。
篩選方法如下：
（一）插入失活法
外源DNA段插入到位于篩選標記基因（抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因）的多克隆位點后，會造成標記基因失活，表現(xiàn)出轉化子相應的抗生素抗性消失或轉化子顏色改變，通過這些可以初步鑒定出轉化子是重組子或非重組子。目前常用的是β-半乳糖苷酶顯色法即藍白篩選法。
（二）PCR篩選和限制酶酶切法
提取轉化子中的重組DNA分子作模板，根據(jù)目的基因已知的兩端序列設計特異引物，通過PCR技術篩選陽性克隆。PCR法篩選出的陽性克隆，用限制性內切酶酶切法進一步鑒定插入片段的大小。
（三）核酸分子雜交法
制備目的基因特異的核酸探針，通過核酸分子雜交法從眾多的轉化子中篩選目的克隆。目的基因特異的核酸探針可以是已獲得的部分目的基因片段,或目的基因表達蛋白的部分序列反推得到的一群寡聚核苷酸,或其它物種的同源基因。
（四）免疫學篩選法
獲得目的基因表達的蛋白抗體，就可以采用免疫學篩選法獲得目的基因克隆。這些抗體即可是從生物本身純化出目的基因表達蛋白抗體，也可從目的基因部分ORF片段克隆在表達載體中獲得表達蛋白的抗體。
基因工程的載體應具有一些基本的性質：1）在宿主細胞中有獨立的復制和表達的能力，這樣才能使外源重組的DNA段得以擴增。2）分子量盡可能小，以利于在宿主細胞中有較多的拷貝，便于結合更大的外源DNA段。同時在實驗操作中也不易被機械剪切而破壞。3）載體分子中*好具有兩個以上的容易檢測的遺傳標記（如抗藥性標記基因），以賦予宿主細胞的不同表型特征（如對抗生素的抗性）。4）載體本身*好具有盡可能多的限制酶單一切點，為避開外源DNA段中限制酶位點的干擾提供更大的選擇范圍。若載體上的單一酶切位點是位于檢測表型的標記基因之內可造成插入失活效應，則更有利于重組子的篩選。
DNA克隆常用的載體有：質粒載體（plasmid），噬菌體載體（phage），柯斯質粒載體（cosimid），單鏈DNA噬菌體載體（ssDNA phage ），噬粒載體（phagemid）及酵母人工染色體（YAC）等。從總體上講，根據(jù)載體的使用目的，載體可以分為克隆載體，表達載體，測序載體，穿梭載體等。