關(guān)鍵詞:原位分子雜交服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
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原位分子雜交服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br> 與傳統(tǒng)的放射性標記原位雜交相比，熒光原位雜交具有快速、檢測信號強、雜交特異性高和可以多重染色等特點，因此在分子細胞遺傳學領(lǐng)域受到普遍關(guān)注。
實驗方法及步驟
1.  探針變性
將探針在75℃恒溫水浴中溫育5 min，立即置0℃，5～10 min，使雙鏈DNA探針變性。
2.  標本變性
（1）將制備好的染色體玻片標本于50℃培養(yǎng)箱中烤片2～3 h。（經(jīng)Giemsa染色的標本需預先在固定液中退色后再烤片）。 
（2）取出玻片標本，將其浸在70～75℃的體積分數(shù)70% 甲酰胺/2×SSC的變性液中變性2～3 min。 
（3）立即按順序?qū)吮窘?jīng)體積分數(shù)70%、體積分數(shù)90%和體積分數(shù)100%冰乙醇系列脫水，每次5 min，然后空氣干燥。
3.  雜交
將已變性或預退火的DNA探針10 μL 滴于已變性并脫水的玻片標本上，蓋上18×18蓋玻片，用Parafilm封片，置于潮濕暗盒中37℃雜交（約15～17 h）。由于雜交液較少，而且雜交溫度較高，持續(xù)時間又長，因此為了保持標本的濕潤狀態(tài)，此過程在濕盒中進行。
4.  洗脫
此步驟有助于除去非特異性結(jié)合的探針，從而降低本底。
（1） 雜交次日，將標本從37℃溫箱中取出，用刀片輕輕將蓋玻片揭掉。 
（2） 將已雜交的玻片標本放置于已預熱42～50℃的體積分數(shù)50%甲酰胺/2×SSC中洗滌3次，每次5 min。 
（3） 在已預熱42～50℃的1×SSC中洗滌3次，每次5 min。 
（4） 在室溫下，將玻片標本于2×SSC中輕洗一下。 
（5） 取出玻片，自然干燥。 
（6） 取200 μL復染溶液（PI/antifade或DAPI/antifade染液）滴加在玻片標本上，蓋上蓋玻片。
5.  雜交信號的放大（適用于使用生物素標記的探針）
（1） 在玻片的雜交部位加150 μL封閉液I，用保鮮膜覆蓋，37℃溫育20min。 
（2） 去掉保鮮膜，再加150 μL avidin-FITC于標本上，用保鮮膜覆蓋，37℃繼續(xù)溫育40 min。 
（3） 取出標本，將其放入已預熱42～50℃的洗脫液中洗滌3次，每次5 min。 
（4） 在玻片標本的雜交部位加150 μL封閉液II，覆蓋保鮮膜，37℃溫育20 min。
（5） 去掉保鮮膜，加150 μL antiavidin于標本上，覆蓋新的保鮮膜，37℃溫育40 min。 
（6） 取出標本，將其放入已預熱42～50℃的新洗脫液中，洗滌3次，每次5 min。 
（7） 重復步驟（1）、（2）、（3），再于2×SSC中室溫清洗一下。 
（8） 取出玻片，自然干燥。 
（9） 取200 μL PI/antifade染液滴加在玻片標本上，蓋上蓋玻片。