關(guān)鍵詞:免疫組織化學IHC服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
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免疫組織化學IHC服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br> 免疫組織化學技術(shù)按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。
免疫組織化學染色
SP法
1)脫蠟、水化;
2)PBS洗2~3次各5分鐘;
3)3%H2O2(80%甲醇)滴加在TMA上，室溫靜置10分鐘;
4)PBS洗2~3次各5分鐘;
5)抗原修復;
6)PBS洗2~3次各5分鐘;
7)滴加正常山羊血清封閉液,室溫20分鐘。甩去多余液體。
8)滴加Ⅰ抗50μl，室溫靜置1小時或者4℃或者37℃1小時。
9)4℃過后需在37℃復溫45分鐘。
10)PBS洗3次各5分鐘;
11)滴加Ⅱ抗40~50μl，室溫靜置，或37℃1小時;
12)II抗中可加入0.05%的tween-20。
13)PBS洗3次各5分鐘;
14)DAB顯色5~10分鐘，在顯微鏡下掌握染色程度;
15)PBS或自來水沖洗10分鐘;
16)蘇木精復染2分鐘，鹽酸酒精分化;
17)自來水沖洗10~15分鐘;
18)脫水、透明、封片、鏡檢。
SABC法
1)脫蠟、水化。
2)PBS洗兩次各5分鐘。
3)用蒸餾水或PBS配置新鮮的3%H2O2，室溫封閉5~10分鐘，蒸餾水洗3次。
4)抗原修復。
5)PBS洗5分鐘。
6)滴加正常山羊血清封閉液，室溫20分鐘。甩去多余液體。
7)滴加Ⅰ抗,室溫1小時或者4℃或者37℃1小時(4℃后在37℃復溫45分鐘)。
8)PBS洗三次每次2分鐘。
9)滴加生物素化二抗,20℃~37℃20分鐘。
10)PBS洗3次每次2分鐘。
11)滴加試劑SABC，20℃~37℃20分鐘。
12)PBS洗4次每次5分鐘。
13)DAB顯色:DAB顯色試劑盒或者自配顯色劑顯色(鏡下掌握顯色程度)。
14)蒸餾水洗。蘇木素復染2分鐘、鹽酸酒精分化。
15)脫水、透明、封片、鏡檢。
多抗和單抗特性比較
1.均一性。一種單抗中，每個抗體的化學結(jié)構(gòu)和氨基酸順序都相同，只有一種Ig亞類。即單抗是一種純度很高的均一抗體。而從不同動物，不同時期所得到的多抗，各有不同的化學組成。多抗是多種種類和亞類Ig的混合物。
2. 穩(wěn)定性。單抗的穩(wěn)定較差，對PH變化敏感，對熱不穩(wěn)定，提純過程中易變性，而多抗的穩(wěn)定性則較好。
3. 特異性。單抗是單一地針對抗原的某一決定簇，所以用它進行血清學反應(yīng)時，特異性強，敏感性高，一般不發(fā)生交叉反應(yīng)。而多抗能與抗原上的多種抗原決定簇結(jié)合，所以特異性較差，較易引起交叉反應(yīng)。
4.重復性。單抗的重復性好，而多抗每批都不一樣。
5. 沉淀反應(yīng)。多抗由于與抗原多價結(jié)合容易形成網(wǎng)絡(luò)樣沉淀，而單抗只與抗原結(jié)合產(chǎn)生二聚體，不能直接形成抗原抗體沉淀物。