關(guān)鍵詞:Transwell實驗服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
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Transwell實驗服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br> 細胞種在上室內(nèi)，因聚碳酸酯膜有通透性，故可研究下層培養(yǎng)液中的成分對細胞生長、運動等的影響。
根據(jù)transwell的特點（孔徑，膜），可進行如下方面研究：
1.共培養(yǎng)                   孔徑<3.0um
研究下室細胞B代謝物（分泌物）對上室細胞A的影響。
2.細胞趨化               孔徑可選擇5.0、8.0、12.0μm
研究進入下室的細胞量，反映下室成分對上室細胞的趨化能力
3.細胞遷移               孔徑常選擇8.0、12.0μm
研究進入下室的細胞量，反應(yīng)上室細胞的遷移能力
4.細胞侵襲               孔徑常選擇8.0、12.0μm，膜上室側(cè)鋪有基質(zhì)膠，
研究進入下室的細胞量，反映上室細胞的侵襲能力
一、腫瘤細胞侵襲實驗（transwell）
原理：
模仿體內(nèi)細胞外基質(zhì)，細胞只有分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs），降解基質(zhì)膠才可進入下室。
步驟
1.  Transwell小室準(zhǔn)備
1）無基質(zhì)膠Transwell小室制備
A. 包被基底膜：
A. Matrigel (50mg/L)按1:8稀釋，無血清培養(yǎng)基作為稀釋液
B. 取適量加入Transwell小室中(24孔板transwell小室加100 ul)，4℃操作。
C. 37℃培養(yǎng)箱中，孵育4-5h（>5h）；出現(xiàn)“白色層”時，說明已經(jīng)變?yōu)楣虘B(tài)。
2）有基質(zhì)膠Transwell小室制備
A. 小室放入培養(yǎng)板中，上室加入300μl預(yù)溫的無血清培養(yǎng)基
B. 室溫下靜置15－30min，使基質(zhì)膠再水化
C. 再吸去剩余培養(yǎng)液。
2．細胞懸液準(zhǔn)備
1）消化、收集細胞；
2）PBS洗1－2次
3）用含BSA的無血清培養(yǎng)基重懸（細胞密度約在1－10×105/ml）。
3. 細胞接種
1）取適量細胞懸液加入Transwell小室（按transwell說明）。24孔板小室一般200μl。
2）24孔板下室一般加入500μl含F(xiàn)BS或趨化因子的培養(yǎng)基。注意避免氣泡產(chǎn)生（下層培養(yǎng)液和小室間）
3） 培養(yǎng)細胞：常規(guī)培養(yǎng)12－48h（主要依癌細胞侵襲能力而定）。
4. 結(jié)果統(tǒng)計